Preparo de solução estoque de biotina (em PBS)

Guia de preparo de soluções estoque – Biotina em PBS

A biotina (vitamina B7) é uma vitamina hidrossolúvel que é apenas ligeiramente solúvel em água neutra, mas se dissolve mais facilmente em soluções mornas ou alcalinas. Uma solução estoque de biotina a 1 mM pode ser preparada em solução salina tamponada com fosfato (PBS) para uso em ensaios bioquímicos e suplementos de cultura celular.

Objetivo

Preparo de 10 mL de solução estoque de biotina a 1 mM em PBS.

Composição

• Biotina a 1 mM (C₁₀H₁₆N₂O₃S) em PBS

Materiais necessários

• Biotina (massa molar 244.31 g/mol)
• Solução salina tamponada com fosfato (PBS)
• NaOH a 1 N (opcional, para auxiliar a dissolução)
• Água deionizada / destilada
• Tubo graduado de 15 mL com tampa de rosca
• Agitador vórtex ou rotador de tubos
• Filtro de seringa (0.22 µm) para esterilização
• Equipamentos de proteção individual (luvas, óculos, jaleco)

Procedimento

• Etapa 1
  Pese **2.44 mg** de biotina (para 10 mL de solução estoque a 1 mM). Transfira o sólido para um tubo graduado de 15 mL.
• Etapa 2
  Adicione **9 mL de PBS** e misture (em vórtex ou por rotação) para dissolver. Se necessário, adicione algumas gotas de NaOH a 1 N para ajudar a dissolver a biotina; não dissolva apenas em água pura.
• Etapa 3
  Ajuste o volume da solução para **10 mL** com água deionizada. Misture novamente.
• Etapa 4
  Esterilize por filtração com um **filtro de seringa de 0.22 µm** para um recipiente estéril em condições assépticas.

Armazenamento: Distribua assepticamente em pequenas alíquotas (por exemplo, 0.5 mL ou 1 mL). Armazene a **–20 °C** até o uso para manter a estabilidade.

Reagentes disponíveis