Herstellung einer DTT-Stammlösung

Anleitung zur Herstellung einer Stammlösung – DTT (Dithiothreitol)

Dithiothreitol (DTT), auch Clelands Reagenz genannt, ist ein häufig verwendetes Reduktionsmittel in der Proteinbiochemie. Es reduziert Disulfidbindungen (–S–S–), stabilisiert Enzyme und schützt funktionelle Thiolgruppen in Proteinen. Wässrige Stammlösungen sollten wegen ihrer Oxidationsempfindlichkeit vorzugsweise frisch hergestellt werden.

Chemische Informationen

Name	Summenformel	Molare Masse	CAS
DTT (DL-Dithiothreitol)	C₄H₁₀O₂S₂	154.25 g/mol	3483-12-3

Anwendungen

Reduktion von Disulfidbindungen in Proteinen
Enzymstabilisierung
Probenvorbereitung für SDS-PAGE und Western Blot

Löslichkeit und Handhabung

DTT ist ein weißer kristalliner Feststoff, der sehr gut wasserlöslich ist und klare Lösungen bildet.
Stammlösungen in nukleasefreiem Wasser herstellen; Luftoxidation verringert die Aktivität mit der Zeit.
DTT-Lösungen nicht autoklavieren, da Hitze das Reduktionsmittel abbaut.

Herstellung der Stammlösung

Zur Herstellung einer 1 M DTT-Stammlösung die benötigte Masse anhand der molaren Masse berechnen:

Benötigte Masse (g) = Molare Masse × Volumen (L) × Konzentration (mol/L)
Für 10 mL einer 1 M Lösung: 154.25 × 0.010 × 1 = 1.54 g

1.54 g DTT-Pulver abwiegen.
In ein sauberes Röhrchen überführen und ~8–9 mL nukleasefreies Wasser zugeben.
Bis zur vollständigen Auflösung mischen.
Das Volumen mit nukleasefreiem Wasser auf 10 mL einstellen.
Bei Bedarf mit einem 0.22 µm Filter sterilisieren.
In Einmalportionen aliquotieren und bei −20 °C lagern.

Lagerung und Stabilität

Festes DTT für langfristige Stabilität trocken bei 2–8 °C lagern.
Stammlösungen am besten aliquotiert bei −20 °C lagern, um Oxidation zu minimieren.
Wässriges DTT neigt zur Oxidation; für kritische Experimente frische Arbeitslösungen herstellen.