Rechner für TCID50 für Endpunktverdünnungsassays

TCID50-Rechner für Endpunktverdünnungsassays

Dieses Tool berechnet TCID50/mL (50%-Gewebekultur-Infektionsdosis pro mL) aus Daten von Endpunktverdünnungsassays nach der Reed–Muench- oder Spearman–Kärber-Methode. Es soll den Aufwand bei der Arbeit mit Tabellenkalkulationen verringern und die Einheitlichkeit routinemäßiger Virustiterbestimmungen verbessern.

Warum die Genauigkeit der TCID50 wichtig ist

Zuverlässige TCID50-Werte sind die Grundlage für die Standardisierung der Viruslast, die Reproduzierbarkeit von Assays und den Vergleich von Ergebnissen zwischen Experimenten. Kleine Rechenfehler können sich fortpflanzen und zu großen Unterschieden bei der anschließenden Dateninterpretation führen.

Dateneingabe

Geben Sie Ihren Datensatz mit Anfangskonzentration / Verdünnungsfaktor / Inokulationsvolumen sowie der Anzahl positiver Wells / Gesamtzahl der Wells ein. Stellen Sie sicher, dass die beobachteten positiven Wells gleich bleiben oder abnehmen und die Gesamtzahlen je Verdünnung identisch sind. Sie können bis zu 1-10 Testreihen eingeben.

Verwenden Sie gleichmäßige Verdünnungsschritte, bestätigen Sie die Bewertungskriterien (CPE oder Endpunkt) und überprüfen Sie vor der Berechnung nochmals die höchste Verdünnung mit 100% CPE.

Wenn Sie eine Schätzung von TCID50 in PFU benötigen, betrachten Sie sie als grobe, auf der Poisson-Verteilung beruhende Umrechnung und nicht als Ersatz für eine Validierung mittels Plaque-Assay. BioCalculator formuliert dies bewusst zurückhaltend, da TCID50, PFU, Zelllinie, Inokulationsvolumen und Bewertungsbedingungen zwischen Assays nicht vollkommen übereinstimmen.

So berechnen Sie die TCID50

Reed–Muench-Methode

Schritt eins. Infektionsrate berechnen:

Infektionsrate = kumulierte positive Einheiten / (kumulierte positive Einheiten + kumulierte negative Einheiten)

Schritt zwei. Verdünnungen oberhalb und unterhalb von 50% positiven Einheiten ermitteln und anschließend den proportionalen Abstand (PD) berechnen:

PD = (Positivanteil oberhalb von 50% − 50%) / (Positivanteil oberhalb von 50% − Positivanteil unterhalb von 50%)

Schritt drei. logID50 berechnen:

logID50 = log(Verdünnung mit > 50% positiven Einheiten) + PD × (−log(Verdünnungsfaktor))

Spearman–Kärber-Methode

Schätzen Sie logID50 direkt mit der folgenden Formel:

logID50 = log(höchste Verdünnung mit 100% CPE) + 0.5 − (Gesamtzahl der Testeinheiten mit CPE / Anzahl der Testeinheiten je Verdünnung)

Hauptfunktionen

Flexible Berechnungsmethoden:
Unterstützt sowohl die Reed–Muench- als auch die Spearman–Kärber-Methode zum Vergleich und zur Kompatibilität mit Laborprotokollen.
Vereinfachte Dateneingabe:
Einfache Eingabe von Verdünnungsreihen, Inokulationsvolumina und positiven/gesamten Wells.
Sofortige Ergebnisse:
Liefert logID50 sofort mit nachvollziehbaren Berechnungsschritten.
Zuverlässiger Arbeitsablauf:
Verringert Übertragungs- und Formelfehler, die bei Tabellenkalkulationen häufig auftreten.
Praxisgerechte Dokumentation:
Fördern Sie die Dokumentation von Probendetails (Stamm, Zelllinie, ausführende Person, Datum), um die Reproduzierbarkeit zu gewährleisten.

Anwendungen

Genaue Virustiterbestimmung für die Impfstoffentwicklung und antivirale Forschung.
Standardisierung von Virusstocks zwischen experimentellen Chargen.
Standortübergreifende Kooperationsstudien, die eine einheitliche TCID50-Messung erfordern.