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RIPA裂解缓冲液（Radio Immuno Precipitation Assay buffer）是一种广泛使用的细胞/组织裂解缓冲液，用于提取总蛋白，包括膜蛋白、胞质蛋白和核蛋白。由于含有离子和非离子去垢剂组合，其能有效溶解蛋白，同时在下游如Western blot和免疫沉淀实验中常保持多数抗原表位。
RIPA裂解缓冲液 – 成分
| 名称 | 分子式 | 浓度 | CAS号 |
|---|---|---|---|
| Tris‑Cl (pH 7.4) | C₄H₁₁NO₃ | 50 mM | 77‑86‑1 |
| 氯化钠 | NaCl | 150 mM | 7647‑14‑5 |
| NP‑40 | (C₂H₄O)nC₁₄H₂₂O | 1% (v/v) | 26027‑38‑3 |
| SDS (可选) | C₁₂H₂₅O₄NaS | 0.1% (w/v) | 151‑21‑3 |
| 脱氧胆酸钠 | C₂₄H₃₉NaO₄ | 0.5% (w/v) | 302‑95‑4 |
| EDTA (可选) | C₁₀H₁₆N₂O₈ | 1 mM | 60‑00‑4 |
灭菌与储存
- 灭菌：通常无需灭菌；含有去垢剂的缓冲液如需除菌可过滤（0.22 μm），但不建议高压灭菌以免破坏去垢剂或EDTA。
- 储存：室温或4 °C；使用时请在冰上放置工作量。
操作提示与说明
- 在使用当天加入蛋白酶和磷酸酶抑制剂（如抑蛋白酶肽、亮抑酶肽、胃蛋白酶抑制剂、PMSF、Na₃VO₄、NaF）以防止蛋白降解；PMSF在水溶液中非常不稳定，应在使用前立即添加。
- 在部分配方中，可用Triton X‑100替代NP‑40。
- 若需保持蛋白质间相互作用或减少去垢剂造成的变性，可以选择不含离子型去垢剂的缓冲液。
- 脱氧胆酸钠浓度可在0.1–1%范围内根据细胞种类和裂解强度自行调整。
- 所有裂解步骤应在冰上或4 °C 下进行以最小化蛋白降解和变性。
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