Preparación de solución madre de ortovanadato de sodio

Guía de preparación de solución madre – Ortovanadato de sodio (Na₃VO₄) de 0.2 M

El ortovanadato de sodio (Na₃VO₄) se utiliza ampliamente en experimentos bioquímicos como **inhibidor de fosfatasas** y suele prepararse como **solución madre de 200 mM (0.2 M)**. Para maximizar la actividad inhibidora, la solución debe activarse (despolimerizarse) mediante ajustes repetidos del pH y ebullición, para que permanezca incolora y estable a pH 10.

Objetivo

Preparación de **20 mL de solución madre de ortovanadato de sodio de 0.2 M** para uso en tampones de lisis celular o ensayos enzimáticos.

Composición

• Ortovanadato de sodio (Na₃VO₄) en agua desionizada/Milli‑Q a 0.2 M (200 mM)

Materiales necesarios

• Ortovanadato de sodio (Na₃VO₄) sólido
• Ácido clorhídrico (HCl) de 6 M o HCl de 1 M
• Agua desionizada / Milli‑Q
• Tubo de 50 mL con tapón de rosca para disolver y mezclar; recipiente con ventilación para liberar la presión, resistente al calor y aprobado por su fabricante para el método de calentamiento seleccionado
• Microondas o baño de agua hirviendo
• Medidor de pH o tiras capaces de medir pH 10
• Pipetas aforadas/micropipetas
• Equipo de protección personal (guantes, gafas, bata)

Procedimiento

• Paso 1
  Pesar **0.736 g** de ortovanadato de sodio (masa molecular = 183.91) en un tubo de 50 mL con tapón de rosca. Añadir **15 mL** de agua desionizada/Milli‑Q y mezclar por inversión hasta disolver (≈ 5 min).
• Paso 2
  Ajustar el pH de la solución a **10.0** con HCl de 6 M (añadir gota a gota ~10 µL cada vez mientras se mezcla). El pH antes del ajuste puede ser ~13.5 y la solución puede volverse amarilla al añadir ácido.
• Paso 3
  Antes de calentar, comprobar que el recipiente sea adecuado para el método de calentamiento seleccionado y que su tapón esté retirado o aflojado para permitir la liberación de presión; transferir la solución a un recipiente adecuado si es necesario. No calentar un tubo herméticamente cerrado. Calentar en un baño de agua hirviendo hasta que la solución se vuelva incolora y, después, dejar enfriar a temperatura ambiente. Utilizar el calentamiento por microondas únicamente con un recipiente expresamente aprobado para ese uso y un procedimiento de laboratorio validado.
• Paso 4
  Tras enfriar, reajustar el pH a **10.0** y repetir el ciclo de ebullición/enfriamiento. Realizar **2–3 ciclos** hasta que la solución permanezca incolora y estable a pH 10 al enfriarse.
• Paso 5
  Ajustar el volumen final a **20 mL** con agua desionizada/Milli‑Q y mezclar por inversión.

Nota: Los ciclos repetidos de ajuste de pH y ebullición eliminan las especies poliméricas de vanadato, obteniéndose una solución madre de ortovanadato activa e incolora. Etiquetar las alícuotas con la concentración y la fecha de activación, y almacenar a **–20 °C** en pequeños volúmenes (p. ej., 0.5–1 mL). Desechar si reaparece el color o cambia el pH.

Reactivos disponibles