Préparation d'une solution mère de orthovanadate de sodium

Guide de préparation de solution mère – Orthovanadate de sodium (Na₃VO₄) à 0.2 M

L’orthovanadate de sodium (Na₃VO₄) est largement utilisé dans les expériences biochimiques comme **inhibiteur de phosphatases** et est généralement préparé sous forme de **solution mère à 200 mM (0.2 M)**. Pour maximiser l’activité inhibitrice, la solution doit être activée (dépolymérisée) par des ajustements répétés du pH et des ébullitions, afin de rester incolore et stable à pH 10.

Objectif

Préparation de **20 mL de solution mère d’orthovanadate de sodium à 0.2 M** pour utilisation dans les tampons de lyse cellulaire ou les essais enzymatiques.

Composition

• Orthovanadate de sodium (Na₃VO₄) dans l’eau désionisée/Milli‑Q à 0.2 M (200 mM)

Matériel nécessaire

• Orthovanadate de sodium (Na₃VO₄) solide
• Acide chlorhydrique (HCl) à 6 M ou HCl à 1 M
• Eau désionisée / Milli‑Q
• Tube de 50 mL à bouchon vissé pour la dissolution et le mélange ; récipient permettant l’évacuation de la pression, résistant à la chaleur et approuvé par son fabricant pour la méthode de chauffage choisie
• Four à micro-ondes ou bain d’eau bouillante
• pH-mètre ou bandelettes permettant de mesurer un pH de 10
• Pipettes jaugées/micropipettes
• EPI (gants, lunettes, blouse)

Procédure

• Étape 1
  Peser **0.736 g** d’orthovanadate de sodium (masse moléculaire = 183.91) dans un tube de 50 mL à bouchon vissé. Ajouter **15 mL** d’eau désionisée/Milli‑Q et mélanger par retournement jusqu’à dissolution (≈ 5 min).
• Étape 2
  Ajuster le pH de la solution à **10.0** avec HCl à 6 M (ajouter goutte à goutte ~10 µL à la fois en mélangeant). Le pH initial peut être de ~13.5 et la solution peut jaunir lors de l’ajout d’acide.
• Étape 3
  Avant le chauffage, vérifier que le récipient convient à la méthode de chauffage choisie et que son bouchon est retiré ou desserré pour permettre l’évacuation de la pression ; transférer la solution dans un récipient adapté si nécessaire. Ne pas chauffer un tube hermétiquement fermé. Chauffer dans un bain d’eau bouillante jusqu’à ce que la solution devienne incolore, puis laisser refroidir à température ambiante. N’utiliser le chauffage au micro-ondes qu’avec un récipient explicitement approuvé pour cet usage et une procédure de laboratoire validée.
• Étape 4
  Après refroidissement, réajuster le pH à **10.0** et répéter le cycle ébullition/refroidissement. Effectuer **2–3 cycles** jusqu’à ce que la solution reste incolore et stable à pH 10 après refroidissement.
• Étape 5
  Ajuster le volume final à **20 mL** avec de l’eau désionisée/Milli‑Q et mélanger par retournement.

Remarque : Les cycles répétés d’ajustement du pH et d’ébullition éliminent les espèces polymériques de vanadate, donnant une solution mère d’orthovanadate active et incolore. Étiqueter les aliquotes avec la concentration et la date d’activation, puis conserver à **–20 °C** en petits volumes (p. ex., 0.5–1 mL). Jeter si la coloration réapparaît ou si le pH change.

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