Préparation du tampon PCR au chlorure de potassium
Ce guide décrit la préparation d'un tampon PCR à base de chlorure de potassium à une molarité définie pour une utilisation en laboratoire.
Le tampon PCR à base de chlorure de potassium est couramment utilisé pour optimiser l’activité de l’ADN polymérase.
Tampon PCR à base de chlorure de potassium – Composition
| Nom | Formule | Concentration | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris-Cl (pH 9.0) | C₄H₁₁NO₃ | 10 mM | 77-86-1 |
| Chlorure de potassium | KCl | 50 mM | 7447-40-7 |
| Chlorure de magnésium | MgCl₂ | 1.5 mM | 7791-18-6 |
| Triton X-100 | C₃₄H₆₂O₁₁ | 0.1% (w/v) | 9002-93-1 |
Stérilisation et conservation
- Stérilisation : filtration à 0.22 μm.
- Conservation : répartir en aliquotes et conserver à −20 °C.
Conseils
- Le pH du tampon est généralement de 8.0–9.5, ajusté avec du Tris-Cl.
- Le Triton X-100 est très visqueux ; utiliser une solution mère peu concentrée ou le remplacer par du Tween 20.
- Avec un tampon PCR à base de KCl, la concentration de MgCl₂ est généralement plus faible (~1.5 ± 0.25 mM).
- Le tampon PCR optimal dépend de l’ADN polymérase ; suivre les recommandations du fournisseur de l’enzyme.
- L’utilisation directe de MgCl₂ anhydre produit de la chaleur ; l’ajouter par petites portions à une partie du volume de solvant.
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