Herstellung des Kaliumchlorid-PCR-Puffers
Diese Anleitung beschreibt die Herstellung eines PCR-Puffers auf Kaliumchloridbasis mit einer festgelegten Molarität für den Laborgebrauch.
PCR-Puffer auf Kaliumchloridbasis wird häufig zur Optimierung der DNA-Polymerase-Aktivität verwendet.
PCR-Puffer auf Kaliumchloridbasis – Zusammensetzung
| Name | Formel | Konzentration | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris-Cl (pH 9.0) | C₄H₁₁NO₃ | 10 mM | 77-86-1 |
| Kaliumchlorid | KCl | 50 mM | 7447-40-7 |
| Magnesiumchlorid | MgCl₂ | 1.5 mM | 7791-18-6 |
| Triton X-100 | C₃₄H₆₂O₁₁ | 0.1% (w/v) | 9002-93-1 |
Sterilisation und Lagerung
- Sterilisation: Filtration mit 0.22 μm.
- Lagerung: Aliquotieren und bei −20 °C lagern.
Hinweise
- Der pH-Wert des Puffers liegt gewöhnlich bei 8.0–9.5 und wird mit Tris-Cl eingestellt.
- Triton X-100 ist sehr viskos; eine niedrig konzentrierte Stammlösung verwenden oder durch Tween 20 ersetzen.
- Bei Verwendung eines PCR-Puffers auf KCl-Basis liegt MgCl₂ gewöhnlich in niedrigerer Konzentration vor (~1.5 ± 0.25 mM).
- Der optimale PCR-Puffer hängt von der DNA-Polymerase ab; die Empfehlungen des Enzymlieferanten beachten.
- Die direkte Verwendung von wasserfreiem MgCl₂ erzeugt Wärme; in kleinen Portionen zu einem Teil des Lösungsmittelvolumens geben.
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