Préparation du tampon TAE
Ce guide décrit la préparation d'un tampon Tris-acétate-EDTA à une molarité définie pour une utilisation en laboratoire.
Le tampon Tris-acétate-EDTA (TAE) est un tampon d'électrophorèse couramment utilisé pour l'analyse des acides nucléiques. Il fournit un pH stable et une chélation efficace des ions métalliques divalents.
Tampon Tris-acétate-EDTA (TAE) – Composition de la solution de travail 1X
| Nom | Formule | Concentration (1X) | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris base | C₄H₁₁NO₃ | 40 mM | 77-86-1 |
| Acide acétique | CH₃CO₂H | 20 mM | 64-19-7 |
| EDTA | C₁₀H₁₆N₂O₈ | 1 mM | 60-00-4 |
Applications du tampon Tris-acétate-EDTA (TAE)
Le tampon TAE est largement utilisé pour l'électrophorèse de l'ADN et de l'ARN sur gel d'agarose. Le Tris assure le pouvoir tampon, l'acide acétique ajuste la force ionique et le pH, et l'EDTA chélate les cations divalents tels que Mg²⁺, inhibant l'activité des nucléases. Le tampon TAE offre une bonne résolution des grands fragments d'ADN et est couramment utilisé pour le clonage, l'analyse de restriction et la séparation courante des acides nucléiques.
Conseils de préparation, stérilisation et conservation
- L'utilisation d'une solution d'EDTA ou d'EDTA·2Na·2H₂O est recommandée.
- Certaines études ont montré que les tampons préparés avec de l'EDTA (acide libre) génèrent moins de chaleur pendant l'électrophorèse, mais nécessitent un temps de préparation plus long.
- L'EDTA (acide libre) est extrêmement difficile à dissoudre et nécessite un pH de 8.0. Il est recommandé de préparer d'abord une solution mère d'EDTA.
- La concentration molaire de l'acide acétique glacial (acide acétique à 100%) est d'environ 17.5 M.
- Si une petite quantité de précipité se forme, elle peut être redissoute en plaçant la solution dans un bain-marie à 37°C, sans compromettre son utilisation. Si le précipité persiste après ce traitement, jeter la solution.
- Stérilisation : généralement non nécessaire ; à choisir selon les besoins.
- Conservation : température ambiante.
