Herstellung des Puffers TAE

Tris-Acetat-EDTA-Puffer (TAE) ist ein häufig verwendeter Elektrophoresepuffer für die Nukleinsäureanalyse. Er sorgt für einen stabilen pH-Wert und eine wirksame Chelatierung zweiwertiger Metallionen.

Tris-Acetat-EDTA-Puffer (TAE) – Zusammensetzung der 1X-Arbeitslösung

Anwendungen von Tris-Acetat-EDTA-Puffer (TAE)

TAE-Puffer wird vielfach für die Agarosegelelektrophorese von DNA und RNA eingesetzt. Tris sorgt für die Pufferkapazität, Essigsäure stellt Ionenstärke und pH-Wert ein, und EDTA chelatiert zweiwertige Kationen wie Mg²⁺ und hemmt so Nukleasen. TAE-Puffer bietet eine gute Auflösung großer DNA-Fragmente und wird häufig beim Klonieren, bei Restriktionsanalysen und bei routinemäßigen Nukleinsäuretrennungen verwendet.

Hinweise zur Herstellung, Sterilisation und Lagerung

• Die Verwendung einer EDTA-Lösung oder von EDTA·2Na·2H₂O wird empfohlen.
• Einige Studien haben gezeigt, dass mit EDTA (freier Säure) hergestellte Puffer während der Elektrophorese weniger Wärme erzeugen, jedoch eine längere Herstellungszeit erfordern.
• EDTA (freie Säure) ist äußerst schwer löslich und benötigt einen pH-Wert von 8.0. Es wird empfohlen, zunächst eine EDTA-Stammlösung herzustellen.
• Die molare Konzentration von Eisessig (100% Essigsäure) beträgt ungefähr 17.5 M.
• Bildet sich eine geringe Menge Niederschlag, kann dieser in einem Wasserbad bei 37°C wieder gelöst werden, ohne die Verwendung zu beeinträchtigen. Bleibt nach der Wasserbadbehandlung Niederschlag zurück, ist die Lösung zu verwerfen.
• Sterilisation: meist nicht erforderlich; je nach Bedarf wählen.
• Lagerung: Raumtemperatur.