Preparo do tampão de transferência Tris-glicina
Este guia descreve o preparo de um tampão de transferência Tris-glicina em uma molaridade definida para uso em laboratório.
O tampão de transferência Tris-glicina é comumente usado para transferência de proteínas em Western blot.
Tampão de transferência Tris-glicina – Composição
| Nome | Fórmula | Concentração | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris base | C₄H₁₁NO₃ | 25 mM | 77-86-1 |
| Glicina | NH₂CH₂COOH | 192 mM | 56-40-6 |
| Metanol | CH₃OH | 20% (v/v) | 67-56-1 |
Esterilização e armazenamento
- Esterilização: geralmente desnecessária, opcional
- Armazenamento: temperatura ambiente
Dicas
- O pH da solução deve ser 8.3 e não requer ajuste.
- Na concentração 1X, a solução deve conter 20% (v/v) de metanol, ajustável conforme o tamanho da proteína; adicione a quantidade correspondente.
- Para proteínas grandes, aumente a quantidade de SDS (concentração de trabalho típica de 0.025–0.1% w/v) e reduza o metanol; para proteínas pequenas, faça o contrário.
- Pode ocorrer cristalização quando o concentrado 10X é armazenado em temperaturas ambientes mais baixas. Aqueça em banho-maria a 37°C até dissolver completamente antes de diluir e usar.
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