Herstellung des Tris-Glycin-Transferpuffers
Diese Anleitung beschreibt die Herstellung eines Tris-Glycin-Transferpuffers mit einer festgelegten Molarität für den Laborgebrauch.
Tris-Glycin-Transferpuffer wird häufig für den Proteintransfer beim Western Blot verwendet.
Tris-Glycin-Transferpuffer – Zusammensetzung
| Name | Formel | Konzentration | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris-Base | C₄H₁₁NO₃ | 25 mM | 77-86-1 |
| Glycin | NH₂CH₂COOH | 192 mM | 56-40-6 |
| Methanol | CH₃OH | 20% (v/v) | 67-56-1 |
Sterilisation und Lagerung
- Sterilisation: meist nicht erforderlich, optional
- Lagerung: Raumtemperatur
Hinweise
- Der pH-Wert der Lösung sollte 8.3 betragen und muss nicht eingestellt werden.
- Bei einer 1X-Konzentration sollte die Lösung 20% (v/v) Methanol enthalten, anpassbar an die Proteingröße; entsprechend zugeben.
- Bei großen Proteinen die SDS-Menge erhöhen (übliche Arbeitskonzentration 0.025–0.1% w/v) und Methanol reduzieren; bei kleinen Proteinen umgekehrt vorgehen.
- Bei Lagerung des 10X-Konzentrats bei niedrigen Umgebungstemperaturen kann es zur Kristallbildung kommen. Vor Verdünnung und Gebrauch im Wasserbad bei 37°C erwärmen, bis alles vollständig gelöst ist.
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