Preparación de la solución I para aislamiento de plásmidos
Esta guía describe la preparación de la solución I (aislamiento de plásmidos) a una molaridad definida para uso en laboratorio.
La solución I se utiliza en protocolos de aislamiento de plásmidos para resuspender las células bacterianas y proteger el ADN plasmídico antes de la lisis alcalina.
Solución I (aislamiento de plásmidos) – Composición
| Nombre | Fórmula | Concentración | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris-Cl (pH 8.0) | C₄H₁₁NO₃ | 25 mM | 77-86-1 |
| EDTA | C₁₀H₁₆N₂O₈ | 10 mM | 60-00-4 |
| Glucosa (opcional) | C₆H₁₂O₆ | 50 mM | 50-99-7 |
| RNasa A (añadir antes de usar) | N/A | 0.01% (w/v) | 9001-99-4 |
Función de la solución I
La solución I se utiliza para resuspender las células bacterianas recolectadas. Tris-Cl mantiene un pH estable, el EDTA quela cationes divalentes para inhibir las DNasas, la glucosa mantiene la presión osmótica y la RNasa A elimina los contaminantes de ARN.
Consejos de preparación, esterilización y conservación
- La glucosa es opcional en la solución I; sin embargo, si se añade lisozima, debe incluirse glucosa.
- Los tampones que contienen glucosa son propensos al crecimiento bacteriano; conservarlos adecuadamente e inspeccionarlos con cuidado antes de usarlos.
- La actividad de la RNasa A disminuye con el tiempo en solución; los tampones que la contienen deben conservarse a 4°C y utilizarse en un mes.
- La RNasa A puede añadirse por separado justo antes del uso a una concentración final de 100 μg/mL.
- Esterilización: si no se incluye glucosa, la solución puede autoclavarse; de lo contrario, esterilizar Tris-Cl, EDTA y glucosa por separado antes de mezclarlos.
- Conservación: 4°C.
- La mayoría de las formulaciones comerciales de solución I no contienen glucosa y suelen utilizar Tris-Cl a 50 mM.
Vista previa
