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Solution I 是质粒提取过程中用于重悬菌体并在碱裂解前保护质粒 DNA 的缓冲液。
Solution I（质粒提取）—— 成分
| 名称 | 分子式 | 浓度 | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris-Cl（pH 8.0） | C₄H₁₁NO₃ | 25 mM | 77-86-1 |
| EDTA | C₁₀H₁₆N₂O₈ | 10 mM | 60-00-4 |
| 葡萄糖（可选） | C₆H₁₂O₆ | 50 mM | 50-99-7 |
| RNase A（使用前添加） | N/A | 0.01% (w/v) | 9001-99-4 |
Solution I 的作用
Solution I 用于重悬收集的菌体。Tris-Cl 维持稳定 pH，EDTA 螯合二价阳离子以抑制 DNase 活性，葡萄糖维持渗透压，而 RNase A 用于去除 RNA 杂质。
配制提示、灭菌与储存
- Solution I 中葡萄糖为可选成分，但若额外加入溶菌酶，则必须添加葡萄糖;
- 含葡萄糖的缓冲液容易滋生细菌，请妥善保存并在使用前仔细检查;
- RNase A 在溶液中的活性会随时间降低，含 RNase A 的缓冲液请于 4°C 保存，并在 1 个月内使用;
- RNase A 也可在使用前单独加入，最终浓度为 100 μg/mL;
- 灭菌方式：若不含葡萄糖可高压灭菌；否则请将 Tris-Cl、EDTA 与葡萄糖溶液分别灭菌后再行混合;
- 储存条件：4°C;
- 市售 Solution I 多数不含葡萄糖，且 Tris-Cl 浓度通常为 50 mM，请自行评估实验需求。
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