Preparo da solução I para isolamento de plasmídeos
Este guia descreve o preparo da solução I (isolamento de plasmídeos) em uma molaridade definida para uso em laboratório.
A solução I é usada em protocolos de isolamento de plasmídeos para ressuspender células bacterianas e proteger o DNA plasmidial antes da lise alcalina.
Solução I (isolamento de plasmídeos) – Composição
| Nome | Fórmula | Concentração | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris-Cl (pH 8.0) | C₄H₁₁NO₃ | 25 mM | 77-86-1 |
| EDTA | C₁₀H₁₆N₂O₈ | 10 mM | 60-00-4 |
| Glicose (opcional) | C₆H₁₂O₆ | 50 mM | 50-99-7 |
| RNase A (adicionar antes do uso) | N/A | 0.01% (w/v) | 9001-99-4 |
Função da solução I
A solução I é usada para ressuspender células bacterianas coletadas. O Tris-Cl mantém o pH estável, o EDTA quela cátions divalentes para inibir DNases, a glicose mantém a pressão osmótica e a RNase A remove contaminantes de RNA.
Dicas de preparo, esterilização e armazenamento
- A glicose é opcional na solução I; porém, se for adicionada lisozima, a glicose deve ser incluída.
- Tampões contendo glicose são propensos ao crescimento bacteriano; armazene adequadamente e inspecione com cuidado antes do uso.
- A atividade da RNase A diminui com o tempo em solução; tampões contendo RNase A devem ser armazenados a 4°C e usados em até um mês.
- A RNase A pode ser adicionada separadamente imediatamente antes do uso, a uma concentração final de 100 μg/mL.
- Esterilização: se a glicose for omitida, a solução pode ser autoclavada; caso contrário, esterilize Tris-Cl, EDTA e glicose separadamente antes de misturar.
- Armazenamento: 4°C.
- A maioria das formulações comerciais de solução I não contém glicose e normalmente usa Tris-Cl a 50 mM.
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