Préparation du tampon PCR au sulfate d'ammonium
Ce guide décrit la préparation d'un tampon PCR au sulfate d'ammonium à une molarité définie pour une utilisation en laboratoire.
Le tampon PCR au sulfate d’ammonium est couramment utilisé pour améliorer la spécificité des amorces et optimiser l’activité de l’ADN polymérase.
Tampon PCR au sulfate d’ammonium – Composition
| Nom | Formule | Concentration | CAS |
|---|---|---|---|
| Sulfate d’ammonium | (NH₄)₂SO₄ | 20 mM | 7783-20-2 |
| Tris-Cl (pH 8.8) | C₄H₁₁NO₃ | 75 mM | 77-86-1 |
| Chlorure de magnésium | MgCl₂ | 2 mM | 7791-18-6 |
| Triton X-100 | C₃₄H₆₂O₁₁ | 0.1% (w/v) | 9002-93-1 |
Stérilisation et conservation
- Stérilisation : filtration à 0.22 μm.
- Conservation : répartir en aliquotes et conserver à −20 °C.
Conseils
- Le pH du tampon est généralement de 8.0–9.5, ajusté avec du Tris-Cl.
- Le Triton X-100 est très visqueux ; utiliser une solution mère peu concentrée ou le remplacer par du Tween 20.
- En présence de sulfate d’ammonium, la concentration de MgCl₂ est généralement plus élevée (2.0 ± 0.5 mM).
- NH₄⁺ et Mg²⁺ exercent des effets antagonistes ; les tampons contenant du sulfate d’ammonium présentent une spécificité accrue des amorces sur différentes plages de concentration de Mg²⁺.
- Les ions ammonium déstabilisent les liaisons hydrogène entre amorce et matrice mal appariées, ce qui améliore la spécificité de la réaction.
- Le tampon PCR optimal dépend du type d’ADN polymérase ; suivre les recommandations du fournisseur.
- L’utilisation directe de MgCl₂ anhydre est exothermique ; l’ajouter par petites portions à une partie du volume de solvant.
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