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硫酸銨PCR緩衝液常用於提升引子專一性並優化DNA聚合酶活性。
硫酸銨PCR緩衝液 – 成分
| 名稱 | 分子式 | 濃度 | CAS號 |
|---|---|---|---|
| 硫酸銨 | (NH₄)₂SO₄ | 20 mM | 7783-20-2 |
| Tris-Cl (pH 8.8) | C₄H₁₁NO₃ | 75 mM | 77-86-1 |
| 氯化鎂 | MgCl₂ | 2 mM | 7791-18-6 |
| Triton X-100 | C₃₄H₆₂O₁₁ | 0.1% (w/v) | 9002-93-1 |
滅菌與儲存
- 滅菌：0.22 μm過濾。
- 儲存：分裝後-20 °C冷凍保存。
操作提示
- 緩衝液pH通常為8.0–9.5，可透過Tris-Cl調節。
- Triton X-100極為黏稠，建議使用低濃度儲備液，也可用Tween 20替代。
- 使用硫酸銨配製時，MgCl₂濃度通常較高（2.0 ± 0.5 mM）。
- NH₄⁺與Mg²⁺具有拮抗效應，含硫酸銨的緩衝液在不同Mg²⁺濃度下皆能表現出更高引子專一性。
- 銨離子可破壞錯配引子－模板間的氫鍵，從而提升反應專一性。
- 最佳PCR緩衝液取決於DNA聚合酶種類，請遵循供應商建議。
- 直接使用無水氯化鎂配製時會放熱，建議少量多次加入部分溶劑中。
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