Préparation du tampon DPBS
Ce guide décrit la préparation d'une solution saline tamponnée au phosphate de Dulbecco à une molarité définie pour une utilisation en laboratoire.
La solution saline tamponnée au phosphate de Dulbecco (DPBS) est une solution saline tamponnée au phosphate modifiée, largement utilisée en culture cellulaire et en recherche biologique, dont le pH et l’osmolarité sont optimisés pour les cellules de mammifères.
Solution saline tamponnée au phosphate de Dulbecco (DPBS) – Composition de la solution de travail 1X
| Nom | Formule | Concentration (1X) | CAS |
|---|---|---|---|
| Chlorure de sodium | NaCl | 137 mM | 7647-14-5 |
| Chlorure de potassium | KCl | 2.7 mM | 7447-40-7 |
| Phosphate monopotassique | KH₂PO₄ | 1.47 mM | 7778-77-0 |
| Phosphate disodique | Na₂HPO₄ | 8.1 mM | 7558-79-4 |
| Chlorure de magnésium (facultatif) | MgCl₂ | 0.5 mM | 7786-30-3 |
| Chlorure de calcium (facultatif) | CaCl₂ | 1 mM | 10043-52-4 |
Applications du DPBS
Le DPBS est couramment utilisé pour laver les cellules et les tissus, diluer les échantillons, transporter les cellules et préparer les réactifs dans les procédures de culture cellulaire. Par rapport au PBS standard, le DPBS est formulé pour mieux répondre aux besoins des cellules de mammifères et est fréquemment utilisé pour la dissociation cellulaire, la coloration et la microscopie.
Conseils de préparation, stérilisation et conservation
- En pratique, le pH du DPBS 1X préparé avec de l’eau Milli-Q est généralement compris entre 7.2 et 7.4, et un ajustement n’est habituellement pas nécessaire.
- Si un contrôle strict du pH est nécessaire, mesurer et ajuster le pH après dilution à 1X.
- La conservation du DPBS concentré à 4°C peut provoquer la précipitation de sels. Bien agiter avant utilisation ; jeter si des particules subsistent.
- Le phosphate disodique anhydre est très hygroscopique ; éviter une exposition prolongée pendant la pesée.
- L’ajout de chlorure de calcium et de chlorure de magnésium doit être déterminé par les exigences de l’expérience.
- Le CaCl₂ et le MgCl₂ anhydres dégagent de la chaleur lors de leur dissolution ; manipuler avec précaution.
- Stérilisation : filtration à 0.22 μm ou autoclavage.
- Conservation : température ambiante ou 4 °C.
