Préparation d'une solution mère de Tris-Cl

Guide de préparation de solution mère – Tampon Tris (1 M, pH 7.2)

Le Tris (tris(hydroxyméthyl)aminométhane), également appelé Trizma ou THAM, est un tampon biologique largement utilisé en biologie moléculaire et en biochimie. Son pKa est de ~8.08 à 25 °C et sa plage de tamponnement efficace s’étend de ~7.2 à 9.0, ce qui convient aux applications à pH physiologique. Le pH de la solution dépend de la température et doit être ajusté à la température d’utilisation prévue.

Informations chimiques

Applications

• Tamponnement biologique général entre pH 7.2–9.0
• Préparation des tampons TAE, TBE et TE

Solubilité et manipulation

• Le Tris base est une poudre blanche qui se dissout facilement dans l’eau.
• Le pH variant avec la température, l’ajuster à la température à laquelle le tampon sera utilisé.

Préparation de Tris.Cl à 1 M (pH 7.2)

1. Peser 121.14 g de Tris base et transférer dans un bécher ou une fiole de 1 L.
2. Ajouter ~800 mL d’eau désionisée et dissoudre sous agitation.
3. Si la solution a été chauffée, la laisser refroidir à température ambiante. Ne pas ajuster le pH à chaud.
4. Ajouter lentement HCl concentré en agitant et en surveillant le pH. Laisser la solution revenir à la température prévue pour l’ajustement du pH avant d’effectuer l’ajustement final à pH 7.2. Déterminer la quantité de HCl d’après le pH mesuré, et non d’après un volume fixe.
5. Transférer dans une éprouvette graduée de 1 L et ajuster le volume final à 1000 mL avec de l’eau désionisée.
6. Facultatif : autoclaver pendant 20 min à 15 psi si un tampon stérile est nécessaire.

Conservation et remarques

• Le Tris.Cl à 1 M, pH 7.2, est limpide et incolore ; jeter s’il devient jaunâtre.
• Conserver à température ambiante pendant plusieurs semaines.