Preparación del tampón de lisis RIPA
Esta guía describe la preparación de un tampón de lisis RIPA a una molaridad definida para uso en laboratorio.
El tampón de lisis RIPA (tampón para ensayo de radioinmunoprecipitación) es un tampón de lisis celular y tisular ampliamente utilizado para extraer proteínas totales, incluidas las de membrana, citoplasmáticas y nucleares. Gracias a su mezcla de detergentes iónicos y no iónicos, solubiliza eficazmente las proteínas y conserva muchos epítopos antigénicos para ensayos posteriores como Western blot e inmunoprecipitación.
Tampón de lisis RIPA – Composición
| Nombre | Fórmula | Concentración | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris‑Cl (pH 7.4) | C₄H₁₁NO₃ | 50 mM | 77‑86‑1 |
| Cloruro de sodio | NaCl | 150 mM | 7647‑14‑5 |
| NP‑40 | (C₂H₄O)nC₁₄H₂₂O | 1% (v/v) | 26027‑38‑3 |
| SDS (opcional) | C₁₂H₂₅O₄NaS | 0.1% (w/v) | 151‑21‑3 |
| Desoxicolato de sodio | C₂₄H₃₉NaO₄ | 0.5% (w/v) | 302‑95‑4 |
| EDTA (opcional) | C₁₀H₁₆N₂O₈ | 1 mM | 60‑00‑4 |
Esterilización y almacenamiento
- Esterilización: generalmente no es necesaria; los tampones con detergentes suelen filtrarse (0.22 μm) si es necesario, pero no se autoclavan para evitar la degradación de los detergentes o del EDTA.
- Almacenamiento: temperatura ambiente o 4 °C; mantener las alícuotas de trabajo en hielo durante el uso.
Consejos y notas
- Añadir inhibidores de proteasas y fosfatasas (p. ej., aprotinina, leupeptina, pepstatina, PMSF, Na₃VO₄, NaF) inmediatamente antes del uso para evitar la degradación de las proteínas; el PMSF es inestable en solución acuosa y debe añadirse justo antes de usar.
- Triton X‑100 puede utilizarse como sustituto de NP‑40 en algunas formulaciones.
- Para aplicaciones que preserven las interacciones proteína–proteína, considerar tampones con detergentes iónicos más suaves o sin detergentes iónicos.
- La concentración de desoxicolato de sodio puede ajustarse (normalmente en el intervalo de 0.1–1%) según el tipo celular y la intensidad de lisis requerida.
- Realizar todos los pasos de lisis en hielo o a 4 °C para minimizar la proteólisis y la desnaturalización.
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