Preparo do tampão de lise RIPA

O tampão de lise RIPA (tampão para ensaio de radioimunoprecipitação) é um tampão de lise celular e tecidual amplamente usado para extração de proteínas totais, incluindo proteínas de membrana, citoplasmáticas e nucleares. Devido à sua mistura de detergentes iônicos e não iônicos, solubiliza proteínas de forma eficaz, preservando muitos epítopos antigênicos para ensaios posteriores, como Western blot e imunoprecipitação.

Tampão de lise RIPA – Composição

Nome	Fórmula	Concentração	CAS
Tris‑Cl (pH 7.4)	C₄H₁₁NO₃	50 mM	77‑86‑1
Cloreto de sódio	NaCl	150 mM	7647‑14‑5
NP‑40	(C₂H₄O)nC₁₄H₂₂O	1% (v/v)	26027‑38‑3
SDS (opcional)	C₁₂H₂₅O₄NaS	0.1% (w/v)	151‑21‑3
Desoxicolato de sódio	C₂₄H₃₉NaO₄	0.5% (w/v)	302‑95‑4
EDTA (opcional)	C₁₀H₁₆N₂O₈	1 mM	60‑00‑4

Esterilização e armazenamento

Esterilização: geralmente não é necessária; tampões contendo detergentes normalmente são filtrados (0.22 μm), se necessário, mas não autoclavados, para evitar a degradação dos detergentes ou do EDTA.
Armazenamento: temperatura ambiente ou 4 °C; manter as alíquotas de trabalho no gelo durante o uso.

Dicas e observações

Adicionar inibidores de proteases e fosfatases (por exemplo, aprotinina, leupeptina, pepstatina, PMSF, Na₃VO₄, NaF) imediatamente antes do uso para evitar a degradação das proteínas; o PMSF é instável em solução aquosa e deve ser adicionado imediatamente antes do uso.
O Triton X‑100 pode ser usado como substituto do NP‑40 em algumas formulações.
Para aplicações que preservem as interações proteína–proteína, considerar tampões com detergentes iônicos mais suaves ou sem detergentes iônicos.
A concentração de desoxicolato de sódio pode ser ajustada (geralmente na faixa de 0.1–1%) conforme o tipo celular e a intensidade de lise necessária.
Realizar todas as etapas de lise no gelo ou a 4 °C para minimizar a proteólise e a desnaturação.