Préparation du tampon de lyse RIPA

Le tampon de lyse RIPA (tampon pour dosage par radio-immunoprécipitation) est un tampon de lyse cellulaire et tissulaire largement utilisé pour extraire les protéines totales, notamment membranaires, cytoplasmiques et nucléaires. Grâce à son mélange de détergents ioniques et non ioniques, il solubilise efficacement les protéines tout en préservant de nombreux épitopes antigéniques pour des analyses ultérieures comme le Western blot et l’immunoprécipitation.

Tampon de lyse RIPA – Composition

Nom	Formule	Concentration	CAS
Tris‑Cl (pH 7.4)	C₄H₁₁NO₃	50 mM	77‑86‑1
Chlorure de sodium	NaCl	150 mM	7647‑14‑5
NP‑40	(C₂H₄O)nC₁₄H₂₂O	1% (v/v)	26027‑38‑3
SDS (facultatif)	C₁₂H₂₅O₄NaS	0.1% (w/v)	151‑21‑3
Désoxycholate de sodium	C₂₄H₃₉NaO₄	0.5% (w/v)	302‑95‑4
EDTA (facultatif)	C₁₀H₁₆N₂O₈	1 mM	60‑00‑4

Stérilisation et conservation

Stérilisation : généralement non nécessaire ; si besoin, les tampons contenant des détergents sont habituellement filtrés (0.22 μm), mais pas autoclavés afin d’éviter la dégradation des détergents ou de l’EDTA.
Conservation : température ambiante ou 4 °C ; maintenir les aliquotes de travail sur glace pendant l’utilisation.

Conseils et remarques

Ajouter des inhibiteurs de protéases et de phosphatases (par exemple aprotinine, leupeptine, pepstatine, PMSF, Na₃VO₄, NaF) immédiatement avant utilisation pour éviter la dégradation des protéines ; le PMSF est instable en solution aqueuse et doit être ajouté juste avant utilisation.
Le Triton X‑100 peut remplacer le NP‑40 dans certaines formulations.
Pour les applications visant à préserver les interactions protéine–protéine, envisager des tampons contenant des détergents ioniques plus doux ou sans détergent ionique.
La concentration de désoxycholate de sodium peut être ajustée (généralement dans la plage de 0.1–1%) selon le type cellulaire et l’intensité de lyse requise.
Effectuer toutes les étapes de lyse sur glace ou à 4 °C pour limiter la protéolyse et la dénaturation.