Preparación del tampón TE
Esta guía describe la preparación de un tampón Tris-EDTA a una molaridad definida para uso en laboratorio.
El tampón Tris-EDTA (TE) se utiliza ampliamente para conservar y estabilizar ADN y ARN, manteniendo el pH e inhibiendo la actividad de las nucleasas.
Tampón Tris-EDTA (TE) – Composición de la solución de trabajo 1X
| Nombre | Fórmula | Concentración (1X) | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris-Cl (pH 7.5 u 8.0) | C₄H₁₁NO₃ | 10 mM | 77-86-1 |
| EDTA | C₁₀H₁₆N₂O₈ | 1 mM | 60-00-4 |
Aplicaciones del tampón Tris-EDTA
El tampón Tris-EDTA se utiliza principalmente para conservar, diluir y estabilizar ADN y ARN. Tris mantiene un pH estable, mientras que el EDTA quela iones metálicos divalentes como Mg²⁺ y Ca²⁺, ayudando a inhibir las nucleasas dependientes de metales. El EDTA no inhibe de forma fiable las RNasas independientes de metales, como la RNasa A. El tampón TE se aplica ampliamente en procedimientos de biología molecular, como extracción de ácidos nucleicos, clonación, secuenciación y conservación prolongada del ADN.
Consejos de preparación, esterilización y conservación
- En sentido estricto, se prefiere pH 7.5 para ARN y se utiliza habitualmente pH 8.0 para ADN; no obstante, pH 8.0 suele ser adecuado para ambos.
- El pH de las soluciones de Tris depende de la temperatura. Ajustar siempre el pH a temperatura ambiente.
- Se recomienda comprobar periódicamente el pH para garantizar la estabilidad del tampón.
- La esterilización por filtración de 0.2 μm no garantiza la eliminación o inactivación completa de todas las DNasas.
- El ADN genómico y plasmídico puede conservarse a corto plazo en tampón TE a 4°C o a largo plazo entre −20°C y −80°C. Evitar ciclos repetidos de congelación y descongelación.
- El EDTA (ácido libre) es extremadamente difícil de disolver; se recomienda preparar previamente una solución madre de EDTA.
- Esterilización: autoclavado.
- Conservación: temperatura ambiente.
