Herstellung des Puffers TE
Diese Anleitung beschreibt die Herstellung eines Tris-EDTA-Puffers mit einer festgelegten Molarität für den Laborgebrauch.
Tris-EDTA-Puffer (TE) ist ein weit verbreitetes Puffersystem zur Lagerung und Stabilisierung von DNA und RNA durch Erhaltung des pH-Werts und Hemmung der Nukleaseaktivität.
Tris-EDTA-Puffer (TE) – Zusammensetzung der 1X-Arbeitslösung
| Name | Formel | Konzentration (1X) | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris-Cl (pH 7.5 oder 8.0) | C₄H₁₁NO₃ | 10 mM | 77-86-1 |
| EDTA | C₁₀H₁₆N₂O₈ | 1 mM | 60-00-4 |
Anwendungen von Tris-EDTA-Puffer
Tris-EDTA-Puffer wird hauptsächlich zur Lagerung, Verdünnung und Stabilisierung von DNA und RNA verwendet. Tris hält den pH-Wert stabil, während EDTA zweiwertige Metallionen wie Mg²⁺ und Ca²⁺ chelatiert und so zur Hemmung metallabhängiger Nukleasen beiträgt. Metallunabhängige RNasen wie RNase A werden durch EDTA nicht zuverlässig gehemmt. TE-Puffer wird in molekularbiologischen Verfahren wie Nukleinsäureextraktion, Klonierung, Sequenzierung und langfristiger DNA-Lagerung eingesetzt.
Hinweise zur Herstellung, Sterilisation und Lagerung
- Streng genommen wird für RNA ein pH-Wert von 7.5 bevorzugt, während für DNA häufig pH 8.0 verwendet wird; pH 8.0 ist jedoch im Allgemeinen für beide geeignet.
- Der pH-Wert von Tris-Lösungen ist temperaturabhängig. Den pH-Wert stets bei Raumtemperatur einstellen.
- Zur Sicherstellung der Pufferstabilität wird eine regelmäßige Kontrolle des pH-Werts empfohlen.
- Beachten Sie, dass eine Sterilfiltration mit 0.2 μm die vollständige Entfernung oder Inaktivierung aller DNasen nicht garantiert.
- Genomische DNA und Plasmid-DNA können kurzfristig in TE-Puffer bei 4°C oder langfristig bei −20°C bis −80°C gelagert werden. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen vermeiden.
- EDTA (freie Säure) ist äußerst schwer löslich; es wird empfohlen, vorab eine EDTA-Stammlösung herzustellen.
- Sterilisation: Autoklavieren.
- Lagerung: Raumtemperatur.
