Preparación de solución madre de HEPES
Esta guía describe la preparación de una solución madre de HEPES a una molaridad definida para uso en laboratorio.
Guía de preparación de soluciones madre – Tampón HEPES
El HEPES (ácido 4-(2-hidroxietil)piperazina-1-etanosulfónico) es un tampón de Good zwitteriónico ampliamente utilizado en biología celular e investigación bioquímica. Presenta un pKa de aproximadamente 7.5 a 25 °C y proporciona un tamponamiento eficaz entre pH 6.8 y 8.2, por lo que es adecuado para aplicaciones a pH fisiológico. El HEPES tiene baja unión a iones metálicos y alta solubilidad en agua.
Información química
| Nombre | Fórmula molecular | Masa molar | CAS |
|---|---|---|---|
| HEPES (ácido libre) | C₈H₁₈N₂O₄S | 238.30 g/mol | 7365-45-9 |
| HEPES·Na | C₈H₁₇N₂O₄S·Na | 260.29 g/mol | 75277-39-3 |
| HEPES·0.5Na | C₈H₁₇.₅N₂O₄S·0.5Na | 249.30 g/mol | 103404-87-1 |
Aplicaciones
- Tampón biológico en cultivo celular y ensayos bioquímicos
- Mantenimiento del pH fisiológico en solución
- Uso en ensayos enzimáticos y electroforesis
Preparación de solución madre de HEPES de 1 M (pH ~7.5)
A continuación se presenta un procedimiento habitual para preparar una solución madre de tampón HEPES de 1 M:
- Pese 238.30 g de HEPES (ácido libre).
- Añada a ~800 mL de agua desionizada en un recipiente adecuado y comience a agitar.
- Con un medidor de pH calibrado, añada lentamente una base fuerte (p. ej., NaOH de 10 N) mientras agita hasta alcanzar el pH deseado (p. ej., ~7.5). Controle con cuidado.
- Una vez ajustado el pH, transfiera a una probeta de 1 L y añada agua desionizada hasta un volumen final de 1 L.
- Para aplicaciones estériles, esterilice opcionalmente por filtración con un filtro de 0.22 µm.
Manipulación y conservación
- Las soluciones madre de HEPES son transparentes e incoloras. Conserve a 4 °C o a temperatura ambiente durante períodos cortos.
- Prepare el tampón de trabajo diluyendo la solución madre hasta la concentración deseada (p. ej., 10–25 mM).
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