Herstellung einer HEPES-Stammlösung
Diese Anleitung beschreibt die Herstellung einer HEPES-Stammlösung mit einer festgelegten Molarität für den Laborgebrauch.
Anleitung zur Herstellung einer Stammlösung – HEPES-Puffer
HEPES (4-(2-Hydroxyethyl)piperazin-1-ethansulfonsäure) ist ein zwitterionischer Good-Puffer, der häufig in der Zellbiologie und biochemischen Forschung eingesetzt wird. Sein pKa liegt bei etwa 7.5 bei 25 °C, und es puffert wirksam zwischen pH 6.8 und 8.2, wodurch es sich für Anwendungen bei physiologischem pH eignet. HEPES bindet Metallionen nur schwach und ist sehr gut wasserlöslich.
Chemische Informationen
| Name | Summenformel | Molare Masse | CAS |
|---|---|---|---|
| HEPES (freie Säure) | C₈H₁₈N₂O₄S | 238.30 g/mol | 7365-45-9 |
| HEPES·Na | C₈H₁₇N₂O₄S·Na | 260.29 g/mol | 75277-39-3 |
| HEPES·0.5Na | C₈H₁₇.₅N₂O₄S·0.5Na | 249.30 g/mol | 103404-87-1 |
Anwendungen
- Biologischer Puffer in Zellkultur und biochemischen Assays
- Aufrechterhaltung des physiologischen pH-Werts in Lösung
- Verwendung in Enzymassays und Elektrophorese
Herstellung einer 1 M HEPES-Stammlösung (pH ~7.5)
Nachfolgend eine typische Vorgehensweise zur Herstellung einer 1 M HEPES-Puffer-Stammlösung:
- 238.30 g HEPES (freie Säure) abwiegen.
- Zu ~800 mL deionisiertem Wasser in einem geeigneten Gefäß geben und mit dem Rühren beginnen.
- Unter Kontrolle mit einem kalibrierten pH-Meter langsam eine starke Base (z. B. 10 N NaOH) unter Rühren zugeben, bis der gewünschte pH-Wert (z. B. ~7.5) erreicht ist. Sorgfältig überwachen.
- Nach der pH-Einstellung in einen 1 L Messzylinder überführen und mit deionisiertem Wasser auf ein Endvolumen von 1 L auffüllen.
- Für sterile Anwendungen optional durch einen 0.22 µm Filter sterilfiltrieren.
Handhabung und Lagerung
- HEPES-Stammlösungen sind klar und farblos. Kurzzeitig bei 4 °C oder Raumtemperatur lagern.
- Den Arbeitspuffer durch Verdünnen der Stammlösung auf die gewünschte Konzentration (z. B. 10–25 mM) herstellen.
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