Preparo de solução estoque de HEPES
Este guia descreve o preparo de uma solução estoque de HEPES em uma molaridade definida para uso em laboratório.
Guia de preparo de soluções estoque – Tampão HEPES
O HEPES (ácido 4-(2-hidroxietil)piperazina-1-etanossulfônico) é um tampão de Good zwitteriônico amplamente usado em biologia celular e pesquisa bioquímica. Apresenta pKa em torno de 7.5 a 25 °C e proporciona tamponamento eficaz entre pH 6.8 e 8.2, sendo adequado a aplicações em pH fisiológico. O HEPES apresenta baixa ligação a íons metálicos e alta solubilidade em água.
Informações químicas
| Nome | Fórmula molecular | Massa molar | CAS |
|---|---|---|---|
| HEPES (ácido livre) | C₈H₁₈N₂O₄S | 238.30 g/mol | 7365-45-9 |
| HEPES·Na | C₈H₁₇N₂O₄S·Na | 260.29 g/mol | 75277-39-3 |
| HEPES·0.5Na | C₈H₁₇.₅N₂O₄S·0.5Na | 249.30 g/mol | 103404-87-1 |
Aplicações
- Tampão biológico em cultura celular e ensaios bioquímicos
- Manutenção do pH fisiológico em solução
- Uso em ensaios enzimáticos e eletroforese
Preparo de solução estoque de HEPES a 1 M (pH ~7.5)
A seguir, um procedimento típico para preparar uma solução estoque de tampão HEPES a 1 M:
- Pese 238.30 g de HEPES (ácido livre).
- Adicione a ~800 mL de água deionizada em recipiente adequado e comece a agitar.
- Usando um medidor de pH calibrado, adicione lentamente uma base forte (por exemplo, NaOH a 10 N) sob agitação até atingir o pH desejado (por exemplo, ~7.5). Monitore com cuidado.
- Após ajustar o pH, transfira para uma proveta de 1 L e adicione água deionizada até o volume final de 1 L.
- Para aplicações estéreis, esterilize opcionalmente por filtração com um filtro de 0.22 µm.
Manuseio e armazenamento
- As soluções estoque de HEPES são límpidas e incolores. Armazene a 4 °C ou à temperatura ambiente por períodos curtos.
- Prepare o tampão de trabalho diluindo a solução estoque até a concentração desejada (por exemplo, 10–25 mM).
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