Préparation du tampon de chargement SDS-PAGE

Le tampon de charge SDS-PAGE (tampon d’échantillon) sert à préparer les échantillons de protéines pour l’électrophorèse dénaturante sur gel de polyacrylamide en assurant la dénaturation, en apportant de la densité et en fournissant un colorant de suivi.

Tampon de charge SDS-PAGE – Composition de la solution de travail 1X

Nom	Formule	Concentration (1X)	CAS
Tris-Cl (pH 6.8)	C₄H₁₁NO₃	50 mM	77-86-1
SDS	C₁₂H₂₅O₄NaS	2% (w/v)	151-21-3
Bleu de bromophénol	C₁₉H₁₀Br₄O₅S	0.1% (w/v)	115-39-9
Glycérine	C₃H₈O₃	10% (v/v)	56-81-5
β-Mercaptoéthanol (ajouter avant utilisation)	C₂H₆OS	1% (v/v)	60-24-2

Applications du tampon de charge SDS-PAGE

Le tampon de charge SDS-PAGE sert à dénaturer les protéines, à leur conférer une charge négative uniforme, à augmenter la densité des échantillons pour le chargement et à permettre le suivi visuel de la progression de l’électrophorèse dénaturante sur gel de polyacrylamide.

Conseils de préparation, stérilisation et conservation

La quantité nécessaire d’agent réducteur peut être ajoutée lors de la préparation et la solution conservée à −20°C, mais la perte d’activité au fil du temps peut provoquer des bandes fantômes.
Pour la SDS-PAGE en conditions réductrices, il est recommandé d’ajouter le β-mercaptoéthanol avant utilisation à une concentration finale de 1% (v/v). Le tampon est généralement stable pendant environ un mois après cet ajout.
Le β-mercaptoéthanol est toxique et dégage une forte odeur ; utiliser une protection appropriée.
Des formulations alternatives peuvent être utilisées, par exemple en remplaçant 1% (v/v) de β-mercaptoéthanol par 100 mM de DTT.
Le SDS peut former des précipités floconneux à basse température ; vérifier leur dissolution complète avant utilisation.
Stérilisation : généralement non nécessaire ; décider selon les besoins.
Conservation : température ambiante ; si l’agent réducteur est ajouté à l’avance, conserver les aliquotes à −20°C.