Herstellung des SDS-PAGE-Probenpuffers
Diese Anleitung beschreibt die Herstellung eines SDS-PAGE-Ladepuffers mit einer festgelegten Molarität für den Laborgebrauch.
SDS-PAGE-Ladepuffer (Probenpuffer) dient zur Vorbereitung von Proteinproben für die denaturierende Polyacrylamid-Gelelektrophorese, indem er die Denaturierung bewirkt, die Dichte erhöht und einen Laufmarkerfarbstoff liefert.
SDS-PAGE-Ladepuffer – Zusammensetzung der 1X-Arbeitslösung
| Name | Formel | Konzentration (1X) | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris-Cl (pH 6.8) | C₄H₁₁NO₃ | 50 mM | 77-86-1 |
| SDS | C₁₂H₂₅O₄NaS | 2% (w/v) | 151-21-3 |
| Bromphenolblau | C₁₉H₁₀Br₄O₅S | 0.1% (w/v) | 115-39-9 |
| Glycerin | C₃H₈O₃ | 10% (v/v) | 56-81-5 |
| β-Mercaptoethanol (vor Gebrauch zugeben) | C₂H₆OS | 1% (v/v) | 60-24-2 |
Anwendungen von SDS-PAGE-Ladepuffer
SDS-PAGE-Ladepuffer dient dazu, Proteine zu denaturieren, ihnen eine gleichmäßige negative Ladung zu verleihen, die Probendichte für das Beladen zu erhöhen und den Fortschritt der denaturierenden Polyacrylamid-Gelelektrophorese visuell zu verfolgen.
Hinweise zur Herstellung, Sterilisation und Lagerung
- Die erforderliche Menge an Reduktionsmittel kann während der Herstellung zugesetzt und die Lösung bei −20°C gelagert werden; ein Aktivitätsverlust im Laufe der Zeit kann jedoch Geisterbanden verursachen.
- Für reduzierende SDS-PAGE wird empfohlen, β-Mercaptoethanol vor Gebrauch bis zu einer Endkonzentration von 1% (v/v) zuzugeben. Der Puffer ist nach der Zugabe typischerweise etwa einen Monat stabil.
- β-Mercaptoethanol ist toxisch und hat einen starken Geruch; geeignete Schutzmaßnahmen verwenden.
- Alternative Rezepturen sind möglich, etwa der Ersatz von 1% (v/v) β-Mercaptoethanol durch 100 mM DTT.
- SDS kann bei niedrigen Temperaturen flockige Präzipitate bilden; vor Gebrauch auf vollständige Auflösung achten.
- Sterilisation: In der Regel nicht erforderlich; nach Bedarf entscheiden.
- Lagerung: Raumtemperatur; bei vorab zugesetztem Reduktionsmittel Aliquots bei −20°C lagern.
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