Preparo do tampão de carregamento SDS-PAGE

O tampão de carregamento para SDS-PAGE (tampão de amostra) é usado para preparar amostras de proteínas para eletroforese desnaturante em gel de poliacrilamida, proporcionando desnaturação, densidade e um corante de acompanhamento.

Tampão de carregamento para SDS-PAGE – Composição da solução de trabalho 1X

Nome	Fórmula	Concentração (1X)	CAS
Tris-Cl (pH 6.8)	C₄H₁₁NO₃	50 mM	77-86-1
SDS	C₁₂H₂₅O₄NaS	2% (w/v)	151-21-3
Azul de bromofenol	C₁₉H₁₀Br₄O₅S	0.1% (w/v)	115-39-9
Glicerina	C₃H₈O₃	10% (v/v)	56-81-5
β-Mercaptoetanol (adicionar antes do uso)	C₂H₆OS	1% (v/v)	60-24-2

Aplicações do tampão de carregamento para SDS-PAGE

O tampão de carregamento para SDS-PAGE é usado para desnaturar proteínas, conferir carga negativa uniforme, aumentar a densidade da amostra para o carregamento e permitir o acompanhamento visual do progresso da eletroforese desnaturante em gel de poliacrilamida.

Dicas de preparo, esterilização e armazenamento

A quantidade necessária de agente redutor pode ser adicionada durante o preparo e a solução armazenada a −20°C, mas a perda de atividade ao longo do tempo pode causar bandas fantasma.
Para SDS-PAGE em condições redutoras, recomenda-se adicionar β-mercaptoetanol antes do uso a uma concentração final de 1% (v/v). O tampão geralmente é estável por cerca de um mês após a adição.
O β-mercaptoetanol é tóxico e tem odor forte; usar proteção adequada.
Formulações alternativas podem ser usadas, como substituir β-mercaptoetanol a 1% (v/v) por DTT a 100 mM.
O SDS pode formar precipitados floculentos em temperaturas baixas; garantir a dissolução completa antes do uso.
Esterilização: geralmente não é necessária; decidir conforme a necessidade.
Armazenamento: temperatura ambiente; se o agente redutor for adicionado previamente, armazenar as alíquotas a −20°C.