Preparo de solução estoque de EGTA
Este guia descreve o preparo de uma solução estoque de EGTA em uma molaridade definida para uso em laboratório.
Guia de preparo de soluções estoque – EGTA
O EGTA (ácido etilenoglicoltetracético) é um quelante altamente seletivo de íons cálcio usado em experimentos bioquímicos e de biologia celular para controlar as concentrações de Ca2+ livre. O EGTA se liga a íons cálcio com afinidade muito maior do que ao magnésio, sendo útil em aplicações de tamponamento e quelação que exigem sequestro específico de cálcio.
Propriedades químicas
- Número CAS: 67-42-5
- Fórmula molecular: C14H24N2O10
- Massa molar: 380.35 g/mol
Solubilidade e manuseio
O EGTA é pouco solúvel em água e geralmente exige condições alcalinas (por exemplo, adição de NaOH) para dissolver completamente. Na prática, as soluções estoque são inicialmente preparadas em água ajustada a pH básico para garantir a dissolução, ou em pequenos volumes de NaOH concentrado seguidos de diluição.
- Solúvel em soluções aquosas alcalinas; pode ocorrer precipitação se o pH diminuir.
- Solubilidade limitada em água a pH neutro; aquecimento e sonicação podem auxiliar a solubilização.
Preparo da solução estoque
A seguir estão exemplos de volumes para preparar soluções estoque de EGTA em molaridades comuns. Ajuste as quantidades com base na massa molar exata do lote, se necessário.
5 mM: 0.53 mL por 1 mg
10 mM: 0.26 mL por 1 mg
Após dissolver, ajuste o pH se necessário, complete até o volume final com tampão ou água e esterilize a solução por filtração, se preciso.
Armazenamento e uso
- As soluções estoque podem ser distribuídas em alíquotas e armazenadas a 2-8°C por vários meses.
- Evite ciclos repetidos de congelamento–descongelamento; prepare as diluições de trabalho imediatamente antes do uso.
- Use técnicas estéreis e filtração para evitar contaminação em aplicações de cultura celular.
Aplicações
O EGTA é comumente usado para quelar cálcio em ensaios bioquímicos, preparar tampões com cálcio controlado e modular os níveis de Ca2+ intracelulares ou extracelulares em estudos de biologia celular. Sua alta seletividade pelo cálcio em relação ao magnésio o torna especialmente útil quando é necessária quelação diferencial de íons.
