Herstellung einer EGTA-Stammlösung

Anleitung zur Herstellung einer Stammlösung – EGTA

EGTA (Ethylenglykoltetraessigsäure) ist ein hochselektiver Calciumionen-Chelatbildner, der in biochemischen und zellbiologischen Experimenten zur Kontrolle der Konzentrationen freier Ca²⁺ -Ionen eingesetzt wird. EGTA bindet Calciumionen mit deutlich höherer Affinität als Magnesium und eignet sich daher für Puffer- und Chelatierungsanwendungen, bei denen Calcium spezifisch gebunden werden muss.

Chemische Eigenschaften

• CAS-Nummer: 67-42-5
• Summenformel: C₁₄H₂₄N₂O₁₀
• Molare Masse: 380.35 g/mol

Löslichkeit und Handhabung

EGTA ist in Wasser nur wenig löslich und benötigt üblicherweise alkalische Bedingungen (beispielsweise durch NaOH-Zugabe), um sich vollständig aufzulösen. In der Praxis werden Stammlösungen zunächst in auf basischen pH eingestelltem Wasser oder in kleinen Volumina konzentrierter NaOH mit anschließender Verdünnung hergestellt.

• In alkalischen wässrigen Lösungen löslich; bei sinkendem pH-Wert kann es zur Ausfällung kommen.
• Begrenzte Wasserlöslichkeit bei neutralem pH; Erwärmen und Ultraschallbehandlung können die Solubilisierung unterstützen.

Herstellung der Stammlösung

Nachfolgend sind Beispielvolumina zur Herstellung von EGTA-Stammlösungen mit gängigen Molaritäten angegeben. Die Mengen bei Bedarf anhand der genauen molaren Masse der Charge anpassen.

Nach dem Auflösen bei Bedarf den pH-Wert einstellen, mit Puffer oder Wasser auf das Endvolumen auffüllen und die Lösung gegebenenfalls sterilfiltrieren.

Lagerung und Verwendung

• Stammlösungen können aliquotiert und mehrere Monate bei 2-8°C gelagert werden.
• Wiederholte Gefrier–Auftau-Zyklen vermeiden; Arbeitsverdünnungen unmittelbar vor Gebrauch herstellen.
• Für Zellkulturanwendungen sterile Techniken und Filtration einsetzen, um Kontamination zu vermeiden.

Anwendungen

EGTA wird häufig verwendet, um Calcium in biochemischen Assays zu chelatieren, Puffer mit kontrolliertem Calciumgehalt herzustellen und die intrazellulären oder extrazellulären Ca²⁺ -Spiegel in zellbiologischen Studien zu modulieren. Seine hohe Selektivität für Calcium gegenüber Magnesium macht es besonders nützlich, wenn eine differenzielle Ionenchelatierung erforderlich ist.