Préparation d'une solution mère de IPTG
Ce guide décrit la préparation d'une solution mère d'IPTG à une molarité définie pour une utilisation en laboratoire.
Guide de préparation des solutions mères – IPTG
L’IPTG (isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside) est un analogue du lactose largement utilisé en biologie moléculaire pour induire l’expression de protéines recombinantes chez E. coli sous le contrôle des promoteurs lac ou tac. L’IPTG se lie au répresseur lac, le libérant de l’opérateur lac et permettant la transcription des gènes en aval. Il est également utilisé pour la sélection bleu/blanc en clonage.
Informations chimiques
| Nom | Formule moléculaire | Masse molaire | CAS |
|---|---|---|---|
| IPTG | C₉H₁₈O₅S | 238.3 g/mol | 367-93-1 |
Applications
- Induction de l’expression de protéines chez E. coli
- Identification des clones positifs par sélection bleu/blanc
Solubilité et manipulation
- L’IPTG est fourni sous forme de poudre cristalline blanche qui se dissout facilement dans l’eau.
- Préparer les solutions mères avec de l’eau exempte de nucléases et des techniques stériles.
- Ne jamais autoclaver les solutions d’IPTG ; la chaleur peut dégrader le composé.
Préparation de la solution mère
Pour préparer une solution mère d’IPTG à 1 M :
Peser 2.38 g de poudre d’IPTG et ajouter à ~8 mL d’eau déionisée.
Mélanger jusqu’à dissolution complète.
Ajouter de l’eau déionisée jusqu’à un volume final de 10 mL et bien mélanger.
Mélanger jusqu’à dissolution complète.
Ajouter de l’eau déionisée jusqu’à un volume final de 10 mL et bien mélanger.
Stérilisation et conservation
- Stériliser par filtration sur un filtre de 0.22 µm dans un récipient stérile.
- Répartir la solution mère en petites aliquotes (p. ex., 0.5–1 mL) pour éviter les cycles répétés de congélation–décongélation.
- Conserver les aliquotes à −20 °C pour une utilisation à long terme.
Aperçu
