Preparo de solução estoque de IPTG
Este guia descreve o preparo de uma solução estoque de IPTG em uma molaridade definida para uso em laboratório.
Guia de preparo de soluções estoque – IPTG
O IPTG (isopropil β-D-1-tiogalactopiranosídeo) é um análogo da lactose amplamente usado em biologia molecular para induzir a expressão de proteínas recombinantes em E. coli sob controle de promotores lac ou tac. O IPTG se liga ao repressor lac, liberando-o do operador lac e permitindo a transcrição dos genes a jusante. Também é usado na seleção azul/branco em clonagem.
Informações químicas
| Nome | Fórmula molecular | Massa molar | CAS |
|---|---|---|---|
| IPTG | C₉H₁₈O₅S | 238.3 g/mol | 367-93-1 |
Aplicações
- Indução da expressão de proteínas em E. coli
- Identificação de clones positivos por seleção azul/branco
Solubilidade e manuseio
- O IPTG é fornecido como pó cristalino branco que se dissolve facilmente em água.
- Prepare as soluções estoque com água livre de nucleases e técnicas estéreis.
- Nunca autoclave soluções de IPTG; o calor pode degradar o composto.
Preparo da solução estoque
Para preparar uma solução estoque de IPTG a 1 M:
Pese 2.38 g de IPTG em pó e adicione a ~8 mL de água deionizada.
Misture até dissolver completamente.
Adicione água deionizada até o volume final de 10 mL e misture bem.
Misture até dissolver completamente.
Adicione água deionizada até o volume final de 10 mL e misture bem.
Esterilização e armazenamento
- Esterilize por filtração com um filtro de 0.22 µm para um recipiente estéril.
- Distribua a solução estoque em pequenas alíquotas (por exemplo, 0.5–1 mL) para evitar ciclos repetidos de congelamento–descongelamento.
- Armazene as alíquotas a −20 °C para uso a longo prazo.
Prévia
